五、痰直接涂片检查法
(一)涂片
取经95%乙醇擦拭脱脂过的干燥、清洁、无油污、无划痕的新玻璃片，于玻片背面的左端1/3 处以蓝色或黑色记号笔(玻璃铅笔)编号。
用接种环或折断的竹签茬端，挑取痰标本的脓样、干酪样部分约005～0.1ml，于玻片正面的右侧三分之二处均匀涂沫成2×25厘米卵圆形痰膜。自然干燥后待检。
一张玻片只可涂沫一份标本。玻片只应使用一次，不得清洗后再次使用。
(二)萋尔-尼尔逊氏染色法(Ziehl-Neelsen)
简称萋尼氏染色法：
1试剂：
1)碱性复红乙醇染色储存液：
碱性复红液：8克碱性复红溶于95%乙醇100毫升中。
5%石碳酸水溶液：5克石碳酸溶于100毫升蒸馏水中。
2)碱性复红乙醇染色液：
10毫升碱性复红储存液与90毫升5%石碳酸水溶液混合。
3)5%盐酸乙醇脱色液：
5毫升浓盐酸与95毫升95%乙醇混合。
4)0.3%亚甲兰复染储存液：
0.3克亚甲兰溶于50毫升95%乙醇中，完全溶解后加蒸馏水至终体积100毫升。
5)亚甲兰复染液：
以蒸馏水10倍稀释0.3%亚甲兰复染储存液即得亚甲兰复染液。
2染色步骤：
1)火焰固定涂片。
2)滴加碱性复红乙醇染色液，盖满痰膜。小心火焰加热至出现蒸汽后，脱离火焰， 保持染色三分钟。染色期间应始终保持痰膜被染色液覆盖，必要时可续加染色液。切勿使染色液沸腾。
3)流水自玻片背面上端轻洗，洗清染色液。
4)自痰膜上端外缘滴加脱色液，流过痰膜。需脱至痰膜无可视红色为止。脱色应单片进行。
5)流水自玻片背面上端轻洗，去脱色液。
6)滴加亚甲兰复染液，染色30秒钟。
7)流水自玻片背面上端轻洗，去复染液。
8)待干后镜检。
3镜检与报告：
光学显微镜镜检(目镜10X，油镜100X)染色痰片。在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈红色，其它细菌和细胞呈蓝色。
按照下列标准报告所得结果：
1)抗酸杆菌阴性： 连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌。
2)抗酸杆菌可疑(±)：1～2条抗酸杆菌/300视野。
3)抗酸杆菌阳性(1+)：3～9条抗酸杆菌/100视野。
4)抗酸杆菌阳性(2+)：1～9条抗酸杆菌/10视野。
5)抗酸杆菌阳性(3+)：1～9条抗酸杆菌/每个视野。
6)抗酸杆菌阳性(4+)：≥10条抗酸杆菌/每视野
。
镜检结果，应及时记录在"结核病细菌学实验室登记本"和化验报告单上。痰涂片化验单应包括痰标本的性状。阴性结果应填记"阴性"不得以"(-)"表达。300个视野内仅见1～2条 抗酸杆菌者，应在报告单上注明条数，医生可结合胸片进行判断。必要时再取标本复查证实，仍见1～2条抗酸杆菌/300个视野，该病例可确诊为涂阳病人。标本应在送检48小时内报告结果。
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